實驗室用紫外分光光度計進行物質定性定量分析的核心設備，其波長準確度（波長示值與真實值的偏差）與分辨率（區分相鄰吸收峰的能力）直接決定分析結果的準確性——波長偏差會導致特征吸收峰定位錯誤，分辨率不足則無法識別復雜樣品中的重疊峰。定期開展兩項指標的驗證，是保障儀器性能穩定、符合實驗數據溯源要求的關鍵環節。

　　一、波長準確度驗證：校準“光譜定位標尺”

　　波長準確度驗證的核心是通過已知特征波長的標準物質，對比儀器示值與標準值的偏差，確保波長示值精準。

　　驗證原理與標準物質選擇

　　利用標準物質（如鐠釹濾光片、汞燈、氘燈）的特征吸收/發射波長作為“基準標尺”：鐠釹濾光片在紫外-可見區有多個特征吸收峰（如279.5nm、287.0nm、333.7nm），適用于200-800nm全波段驗證；汞燈在253.7nm、365.0nm等波長有強發射峰，氘燈在486.0nm、656.1nm有特征發射峰，可作為特定波段的補充驗證。實驗室優先選擇經計量認證的標準物質，確保基準值的可靠性。

　　操作步驟

　　實驗室用紫外分光光度計預熱：開機預熱30分鐘，待光源（氘燈、鎢燈）穩定后進入驗證模式；

　　基線校正：在驗證波長范圍內進行基線掃描，消除背景干擾；

　　標準物質測試：將鐠釹濾光片放入樣品池，在200-800nm范圍內以1nm的波長間隔掃描，記錄各特征吸收峰的儀器示值；若使用汞燈/氘燈，直接記錄儀器顯示的特征發射峰波長；

　　偏差計算：對比儀器示值與標準物質的特征波長標準值，計算絕對偏差（示值-標準值）與相對偏差。

　　判定標準

　　紫外區（200-400nm）絕對偏差需≤±1nm，可見區（400-800nm）絕對偏差需≤±2nm；若偏差超出范圍，需通過儀器自帶的波長校準功能調整（如利用氘燈486.0nm峰進行校準），校準后重新驗證直至符合要求。

　　二、分辨率驗證：檢驗“光譜分辨能力”

　　分辨率驗證主要針對儀器區分相鄰吸收峰的能力，通過測試具有已知峰間距的標準物質，觀察儀器能否清晰分離相鄰峰。

　　驗證原理與標準物質選擇

　　采用苯蒸氣或甲苯溶液作為標準物質：苯蒸氣在254nm附近有一組間距極小的吸收峰（峰間距約0.5nm），甲苯溶液在261.5nm、266.0nm處有相鄰吸收峰（峰間距約4.5nm），可分別驗證實驗室用紫外分光光度計的高分辨率與常規分辨率。也可使用萘的正己烷溶液（221.4nm、224.6nm峰，間距3.2nm），適配不同實驗室的樣品類型。

　　操作步驟

　　樣品制備：配制濃度適宜的標準溶液（如0.05%苯的乙醇溶液、0.1%甲苯的正己烷溶液），確保吸收峰強度適中（吸光度0.3-0.8，避免峰飽和）；

　　掃描參數設置：設置波長間隔為0.1nm（高分辨率驗證）或0.5nm（常規分辨率驗證），掃描速度調至“慢”，確保數據采集充分；

　　掃描與峰識別：將標準溶液放入樣品池掃描，觀察相鄰特征峰的分離情況——若為苯蒸氣，需清晰識別253.0nm、254.6nm、256.2nm的三個獨立峰；若為甲苯溶液，需明確區分261.5nm與266.0nm峰，且兩峰間的谷值吸光度需≤兩峰峰值吸光度平均值的70%（即谷峰比≤0.7）。

　　判定標準

　　高分辨率（苯蒸氣）：能清晰分離254nm附近的三個相鄰峰，峰形對稱無重疊；

　　常規分辨率（甲苯/萘溶液）：相鄰峰的谷峰比≤0.7，且峰位示值偏差符合波長準確度要求；

　　若無法滿足上述要求，需檢查儀器狹縫寬度（狹縫過寬會降低分辨率，通常調整為0.5-1nm）、光源強度（光源衰減會導致峰形平緩），必要時聯系廠家進行光路校準。
 

　　三、驗證周期與注意事項

　　驗證周期：日常使用的儀器每6個月驗證一次；若儀器經歷搬動、維修（如更換光源、單色器）或出現檢測數據異常（如特征峰偏移、峰形異常），需立即開展驗證；

　　操作注意事項：驗證過程中保持實驗室溫度（20-25℃）、濕度（40%-60%）穩定，避免溫濕度波動影響光路穩定性；標準物質需在有效期內使用，且掃描前確保樣品池潔凈無劃痕，防止光散射干擾；

　　記錄與溯源：詳細記錄驗證日期、標準物質信息、儀器參數、測試結果與偏差，形成驗證報告并存檔，確保實驗數據可追溯，滿足CNAS等實驗室認可規范要求。

　　波長準確度與分辨率驗證是實驗室用紫外分光光度計日常維護的核心內容。通過標準化的驗證流程，既能及時發現儀器性能偏差，避免因設備問題導致的實驗誤差，又能為實驗室數據的可靠性提供技術支撐，確保定性定量分析結果的準確性與公信力。